FANCD2 Plasmide Double Nickase (h): sc-400445-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FANCD2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il FANCD2 Double Nickase Plasmid (h) e il FANCD2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FANCD2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: FANCD2 Antibody (FI17): sc-20022
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FANCD2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400445-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FANCD2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400445-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FANCD2 codifica un effettore centrale della via di riparazione dei crosslink interfilamento del DNA della anemia di Fanconi (FA) e coordina il mantenimento del genoma durante la fase S. In risposta a stress replicativo e danno al DNA, FANCD2 viene monoubiquitinata e reclutata sulla cromatina insieme a FANCI, favorendo l’elaborazione nucleolitica, la sintesi translesione e la ricombinazione omologa attraverso il crosstalk con fattori di riparazione associati a BRCA. La funzione di FANCD2 collega la stabilità della forcella replicativa, la segnalazione dei checkpoint e la soppressione delle rotture cromosomiche, sostenendo la vitalità cellulare sotto stress genotossico endogeno ed esogeno. La compromissione o una regolazione difettosa di FANCD2 è associata all’anemia di Fanconi ed è ampiamente studiata nel contesto di fenotipi di instabilità genomica rilevanti per la biologia del cancro e per i disturbi della riparazione del DNA.
FANCD2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FANCD2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FANCD2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FANCD2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FANCD2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.