Partículas Lentivirales de Activación (m) FANCA: sc-420284-LAC

El gen Fanca de ratón codifica FANCA, un componente central de la vía de reparación del ADN de la anemia de Fanconi (FA), que protege la integridad del genoma durante el estrés replicativo. FANCA participa en el ensamblaje y la función del complejo central de la FA, que promueve la monoubiquitinación de FANCD2/FANCI, coordinando el reconocimiento de los enlaces cruzados intercatenarios, la estabilización de la horquilla de replicación acoplada a la reparación y la comunicación con factores de recombinación homóloga. La alteración o insuficiencia de componentes de la vía de la FA se asocia con inestabilidad cromosómica, hipersensibilidad a lesiones por agentes entrecruzantes del ADN y síndromes de fallo de médula ósea característicos de la anemia de Fanconi, lo que convierte a Fanca en un nodo clave para estudiar las respuestas al estrés genotóxico. En sistemas murinos, la biología de FANCA se utiliza con frecuencia para modelar mecanismos conservados de señalización del daño en el ADN, reparación asociada a la replicación y fenotipos hematopoyéticos y del desarrollo impulsados por una reparación deficiente de enlaces cruzados.

Las partículas de activación lentiviral FANCA (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Fanca en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral FANCA (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Fanca, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de FANCA. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Fanca y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.