Partículas Lentivirales de Activación (h) FAM20C: sc-406736-LAC

FAM20C codifica una quinasa secretada o residente en el Golgi que fosforila proteínas extracelulares, con una actividad destacada hacia motivos S-x-E/pS en fosfoproteínas secretadas que configuran la matriz extracelular y la biomineralización. En células humanas, la fosforilación impulsada por FAM20C influye en la maduración de la vía secretora y en la regulación funcional de las proteínas de la matriz, contribuyendo a la diferenciación osteogénica, a la homeostasis mineral de la dentina y el hueso, y a una biología más amplia del tejido conectivo. La alteración de la función de FAM20C se ha vinculado con anomalías esqueléticas y dentales y con un manejo alterado del fosfato, y los cambios en la actividad de FAM20C se han explorado en contextos como la biología tumoral y la señalización célula–matriz. Estas características hacen de FAM20C un nodo útil para estudiar la regulación de quinasas del Golgi, la fosfoproteómica extracelular y las vías de señalización dependientes de la matriz.

Las partículas de activación lentiviral FAM20C (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de FAM20C en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral FAM20C (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción FAM20C, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de FAM20C. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo FAM20C y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.