Exo84 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403472-ACT

ヒトEXOC8はExo84をコードしており、Exo84は、SNARE介在性の膜融合に先立って分泌小胞を細胞膜上の特定部位へと誘導する、8量体のエキソシスト係留複合体（exocyst tethering complex）の中核構成因子である。極性をもったエキソサイトーシスにおける役割を通じて、Exo84は上皮極性の確立、神経突起伸長、繊毛形成、方向性のある細胞移動などの過程を支える。また、小型GTPアーゼ（例：RalやRab経路）のシグナル伝達と連携し、小胞の標的化と細胞骨格の再編成を協調的に制御する。さらに、エキソシスト依存的な輸送は受容体やトランスポーターの細胞表面への送達およびリサイクリングにも影響し、シグナル出力や膜組成を規定する。エキソシスト機能の破綻は、がんモデルにおける細胞極性の変化や浸潤性行動の亢進に関連するほか、発生および神経変性の表現型に結びつく神経系・上皮の恒常性異常とも関連づけられている。

Exo84 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EXOC8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Exo84 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EXOC8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEXOC8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Exo84の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEXOC8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるExo84依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEXOC8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるExo84経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。