Plásmido Doble Nickase (h) Ets-2: sc-416381-NIC

ETS2 codifica Ets-2, un miembro de la familia ETS de factores de transcripción específicos de secuencia que se unen a motivos GGAA/T para regular programas de expresión génica que controlan la progresión del ciclo celular, la diferenciación y la supervivencia. La actividad de Ets-2 está modulada por fosforilación dependiente de MAPK/ERK e integra señales aguas abajo de las vías de factores de crecimiento y citocinas para moldear respuestas transcripcionales en diversos tipos celulares. A través de la regulación de genes implicados en la remodelación de la matriz extracelular, la señalización inflamatoria y la proliferación, ETS2 se ha relacionado con redes oncogénicas y supresoras de tumores dependientes del contexto, así como con fenotipos inmunitarios y del desarrollo. La alteración de la dosis de ETS2 o la activación de sus vías se ha asociado con neoplasias y con procesos biológicos ligados al cromosoma 21, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de la regulación transcripcional y la interacción entre vías de señalización.

Ets-2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ETS2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ETS2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ETS2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ETS2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.