Plásmido CRISPR de Activación (h) Eps8: sc-403249-ACT

EPS8 (Eps8) codifica un sustrato de la vía de EGFR que integra la señalización de receptores tirosina quinasa con la remodelación del citoesqueleto de actina. Eps8 funciona en complejos con proteínas adaptadoras como ABI1 y SOS1 para regular la activación de Rac, el “ruffling” de membrana y el control dinámico de filopodios y lamelipodios, conectando señales de factores de crecimiento con la forma y la motilidad celular. A través de estas funciones, influye en procesos como la endocitosis, la adhesión y la propagación de señales aguas abajo de las redes EGFR/ERBB. La alteración de la expresión de EPS8 o de su acoplamiento a la vía se ha asociado con migración desregulada y señalización proliferativa en múltiples contextos celulares relevantes para enfermedades, lo que lo convierte en un objetivo útil para estudios mecanísticos de la señalización del citoesqueleto.

Eps8 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de EPS8 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Eps8 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus EPS8 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional EPS8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Eps8. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo EPS8 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Eps8 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Eps8 en células tumorales con expresión de EPS8 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.