EphB6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420202

概要

Ephb6は、細胞—細胞コミュニケーションを制御するために、ephrin-Bリガンドとの接触依存的なシグナル伝達に関与するEph受容体型チロシンキナーゼファミリーの一員であるEphB6をコードします。EphB6は他のEphB受容体と比べてキナーゼ活性が低下しているものの、受容体クラスター形成や、細胞骨格リモデリング、細胞接着、方向性移動を制御する下流経路を調節し、RhoファミリーGTPアーゼシグナルやMAPK/PI3Kネットワーク間のクロストークとの関連も示されています。マウス系では、ephrin–Eph勾配が細胞の配置を規定する免疫細胞活性化や組織の構築などの過程でEphB6が研究されています。EphB6関連シグナルの破綻は、上皮の挙動変化や腫瘍関連表現型といった文脈でも検討されており、増殖制御や微小環境との相互作用を解析する研究における機構的ハブ（要所）としての有用性が支持されています。

EphB6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるEphb6遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ephb6内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ephb6のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、EphB6タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、EphB6シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ephb6欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• EphB6の機能に不可欠なEphb6エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ephb6ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• EphB6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびEphB6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ephb6遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  EphB6 HDRプラスミド（m）および EphB6 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEphb6ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEphb6標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。