Plasmide CRISPR/Cas9 KO Epac (h): sc-401807

Présentation

RAPGEF3 code Epac (« exchange protein directly activated by cAMP »), un facteur d’échange de nucléotides guanyliques qui relie la signalisation de l’AMPc à l’activation des petites GTPases Rap1 et Rap2. Epac module la transduction des signaux intracellulaires dans des processus tels que l’adhésion cellulaire, la régulation de la barrière endothéliale, la sécrétion et les réponses dépendantes du calcium, via des voies dépendantes de l’AMPc qui s’articulent avec les réseaux de signalisation de la PKA, des MAPK et des intégrines. Dans les cellules humaines, l’activité de RAPGEF3/Epac influence les fonctions vasculaires et des cellules immunitaires et a été étudiée dans des contextes tels que la régulation métabolique, la signalisation inflammatoire et les phénotypes de migration cellulaire associés aux tumeurs. L’analyse de la signalisation AMPc–Rap dépendante de RAPGEF3 aide à préciser comment la dynamique des seconds messagers façonne le remodelage du cytosquelette et des complexes de signalisation compartimentés.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Epac (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RAPGEF3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RAPGEF3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RAPGEF3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Epac.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RAPGEF3 pour l'étude de la signalisation de Epac, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RAPGEF3 essentiels à la fonction de Epac
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RAPGEF3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Epac plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Epac plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RAPGEF3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Epac plasmide HDR (h) et le Epac (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RAPGEF3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RAPGEF3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.