ENT2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419988
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- ENT2 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico ENT2, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ENT2 Anticuerpo (D-9): sc-373871
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
ENT2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419988 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Slc29a2 codifica el transportador equilibrativo de nucleósidos 2 (ENT2), un transportador de membrana plasmática de amplia expresión que media el flujo bidireccional, dependiente de la concentración, de nucleósidos de purinas y pirimidinas como la adenosina y la inosina. ENT2 ayuda a regular las vías de rescate de nucleósidos, los reservorios intracelulares de nucleótidos y la homeostasis extracelular de adenosina, influyendo así en la síntesis de ADN/ARN, la bioenergética celular y la señalización purinérgica. En sistemas murinos, la actividad alterada de ENT2 es relevante en estudios sobre respuestas al estrés metabólico, señalización inmunitaria e inflamatoria impulsada por la disponibilidad de nucleósidos, y la modulación mediada por transportadores de la captación de fármacos y análogos de nucleósidos. Por ello, Slc29a2 se examina con frecuencia en contextos que vinculan el transporte de nucleósidos con la proliferación, la diferenciación y la homeostasis tisular.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO ENT2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Slc29a2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Slc29a2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Slc29a2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ENT2.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Slc29a2 para la investigación de la señalización de ENT2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Slc29a2 críticos para la función de ENT2
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Slc29a2 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido ENT2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ENT2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Slc29a2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ENT2 (m) y el plásmido HDR ENT2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Slc29a2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Slc29a2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.