ENOPH1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-426793-ACT

O gene Enoph1 de camundongo codifica a ENOPH1 (enolase-fosfatase 1), uma metaloenzima bifuncional na via de reciclagem da metionina que catalisa etapas-chave na conversão de metiltiorribulose-1-fosfato rumo à regeneração de metionina. Ao sustentar o metabolismo da metionina e das poliaminas, a ENOPH1 conecta a homeostase de aminoácidos sulfurados à capacidade de metilação celular, ao equilíbrio redox e às demandas metabólicas associadas à proliferação. Alterações na atividade de reciclagem da metionina têm sido associadas à reprogramação metabólica no câncer e a fenótipos mais amplos influenciados pela disponibilidade de nutrientes e pelo estresse oxidativo. Assim, a ENOPH1 serve como um ponto de interesse útil para estudar a regulação de vias metabólicas e seus efeitos a jusante sobre o crescimento celular e programas responsivos ao estresse em modelos murinos.

ENOPH1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Enoph1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ENOPH1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Enoph1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Enoph1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ENOPH1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Enoph1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ENOPH1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ENOPH1 em células tumorais com expressão de Enoph1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.