Endophilin II Plasmide Double Nickase (h): sc-401620-NIC

SH3GL1 codifica l’endofilina II, una proteina adattatrice contenente un dominio SH3 che collega il rilevamento della curvatura di membrana all’endocitosi, interagendo con partner ricchi in prolina e con moduli di legame ai lipidi durante la formazione di vescicole mediata dalla clatrina. L’endofilina II partecipa al riciclo delle vescicole sinaptiche e all’internalizzazione dei recettori, mettendo in relazione il traffico di membrana con il rimodellamento dell’actina e con gli output di segnalazione dei recettori per fattori di crescita e dei recettori immunitari. Grazie al suo ruolo nella dinamica delle vie endocitiche e nelle reti di interazione proteina‑proteina, SH3GL1 è stato studiato in contesti in cui il traffico vescicolare influenza proliferazione cellulare, differenziamento e risposte allo stress. Alterazioni nella regolazione di SH3GL1 o eventi di fusione sono stati associati a fenotipi di segnalazione e di traffico rilevanti per le neoplasie ematologiche, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici in biologia del cancro e nella funzione delle cellule immunitarie.

Endophilin II Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SH3GL1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SH3GL1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SH3GL1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SH3GL1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.