Endoglin/CD105 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400599-ACT

ENG codifica a endoglina (CD105), uma glicoproteína transmembranar homodimérica que atua como recetor auxiliar no complexo de recetores da superfamília TGF-β. Ela modula a sinalização dependente de SMAD a jusante de ligandos como o TGF-β e as BMPs, influenciando a proliferação e migração de células endoteliais e a remodelação da matriz extracelular durante a angiogénese e a homeostase vascular. A endoglina é altamente expressa no endotélio ativado e em determinados compartimentos do estroma, o que a associa a processos como o desenvolvimento vascular, a remodelação ligada à inflamação e a sinalização responsiva à hipóxia. A desregulação da expressão ou da função de ENG está implicada na biologia das malformações vasculares e na neovascularização aberrante observada em múltiplos contextos de doença.

Endoglin/CD105 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ENG sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Endoglin/CD105 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ENG em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ENG, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Endoglin/CD105. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ENG nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Endoglin/CD105 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Endoglin/CD105 em células tumorais com expressão de ENG silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.