elastin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h2): sc-400640-KO-2

Descripción general

El gen humano **ELN** codifica la elastina, una proteína de la matriz extracelular altamente entrecruzada que aporta elasticidad y capacidad de retroceso a las fibras elásticas de arterias, pulmón y piel. El ensamblaje de la elastina implica andamiajes microfibrilares y entrecruzamiento mediado por lisil oxidasa, lo que favorece la distensibilidad vascular y la mecánica tisular e influye en el comportamiento celular a través de la señalización matriz–integrina y las vías de mecanotransducción. La alteración de **ELN** perturba la formación de fibras elásticas y la homeostasis de la matriz extracelular, modificando el fenotipo de las células de músculo liso y la organización del tejido conectivo. La disfunción de **ELN** se asocia con trastornos de la integridad vascular y del tejido conectivo, como la estenosis aórtica supravalvular, la cutis laxa y otras arteriopatías relacionadas con la elastina.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO elastin (h2) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ELN en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ELN junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ELN tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína elastin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ELN para la investigación de la señalización de elastin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ELN críticos para la función de elastin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ELN para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido elastin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido elastin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ELN. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR elastin (h) y el plásmido HDR elastin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ELN para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ELN definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.