eIF4H Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-411056

Descripción general

EIF4H codifica el factor humano de iniciación de la traducción eIF4H, una proteína accesoria que coopera con eIF4A para estimular la actividad helicasa de ARN dependiente de ATP y favorecer el escaneo a través de UTR 5′ estructuradas durante la iniciación de la traducción dependiente de cap. Al ajustar el reclutamiento de ribosomas y la eficiencia de traducción específica de cada ARNm, eIF4H contribuye a moldear la producción del proteoma en respuesta a señales de crecimiento y al estrés celular, vinculando la función de EIF4H con la regulación de la proliferación, la diferenciación y los programas de adaptación al estrés. La desregulación de componentes de la iniciación de la traducción, incluido eIF4H, se ha asociado con cambios en la expresión de vías oncogénicas y de supervivencia, y se investiga con frecuencia en contextos como la biología tumoral, la neurobiología y el control de la traducción virus–huésped. Por lo tanto, la alteración de EIF4H proporciona un punto de entrada útil para desentrañar los mecanismos de control translacional y sus consecuencias posteriores en la señalización.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO eIF4H (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen EIF4H en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del EIF4H junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de EIF4H tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína eIF4H.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en EIF4H para la investigación de la señalización de eIF4H, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de EIF4H críticos para la función de eIF4H
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de EIF4H para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido eIF4H CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido eIF4H CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus EIF4H. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR eIF4H (h) y el plásmido HDR eIF4H (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología EIF4H para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana EIF4H definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.