eIF4E3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407113

Descripción general

EIF4E3 codifica eIF4E3, un miembro de la familia del factor eucariota de inicio de la traducción 4E que reconoce el cap 5′ del ARNm y contribuye a la regulación del inicio de la traducción dependiente de cap. En comparación con el eIF4E1 canónico, eIF4E3 suele describirse como una proteína no canónica de unión al cap que puede influir en programas de traducción selectivos para determinados ARNm, moldeando la proteostasis y la expresión génica adaptativa al estrés. A través de su impacto en el control traduccional, eIF4E3 se interrelaciona con vías de crecimiento y de detección de nutrientes, como la señalización de mTOR, y con redes más amplias del metabolismo del ARN. La desregulación de la traducción dependiente de cap es una característica recurrente de estados oncogénicos y de respuesta al estrés, lo que convierte a EIF4E3 en una diana útil para estudios mecanísticos del reajuste de la traducción en modelos celulares relevantes para la enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO eIF4E3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen EIF4E3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del EIF4E3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de EIF4E3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína eIF4E3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en EIF4E3 para la investigación de la señalización de eIF4E3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de EIF4E3 críticos para la función de eIF4E3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de EIF4E3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido eIF4E3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido eIF4E3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus EIF4E3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR eIF4E3 (h) y el plásmido HDR eIF4E3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología EIF4E3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana EIF4E3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.