eIF4AIII Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-431393-ACT

O gene **Eif4a3** de camundongo codifica a eIF4AIII, uma helicase de RNA do tipo DEAD-box que atua como componente central do complexo de junção de éxons (exon junction complex, EJC) e conecta o splicing do pré‑mRNA aos mecanismos posteriores de vigilância do mRNA. A eIF4AIII ajuda a depositar e estabilizar o EJC em transcritos já submetidos a splicing, sustentando a degradação de mRNA mediada por nonsense (nonsense-mediated mRNA decay, NMD), a exportação de mRNA e o controle translacional. Por meio dessas vias de processamento de RNA, **Eif4a3** influencia programas globais de expressão gênica importantes para a progressão do ciclo celular, a diferenciação e respostas ao estresse. A desregulação da função do EJC e do NMD tem sido associada à instabilidade do transcriptoma relevante para o neurodesenvolvimento e para o câncer, tornando **Eif4a3** um ponto útil para estudos mecanísticos de controle de qualidade de RNA.

eIF4AIII O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Eif4a3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

eIF4AIII O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Eif4a3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Eif4a3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de eIF4AIII. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Eif4a3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de eIF4AIII no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via eIF4AIII em células tumorais com expressão de Eif4a3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.