eIF4AI Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420146

Descripción general

Eif4a1 codifica la helicasa de ARN tipo DEAD-box eIF4AI del ratón, un componente central de la maquinaria de iniciación de la traducción eIF4F que desenrolla UTR 5′ estructuradas para permitir el escaneo del ribosoma y el reconocimiento del codón de inicio. Mediante la remodelación dependiente de ATP de la estructura secundaria del ARNm, eIF4AI sostiene la traducción dependiente de cap e influye en la proteostasis, la adaptación al estrés y la progresión del ciclo celular. Su actividad se integra con el control de la síntesis proteica regulado por mTOR y puede moldear programas de traducción selectiva que afectan al crecimiento, el metabolismo y la diferenciación. Las dinámicas alteradas de iniciación de la traducción en las que participan helicasas de la familia eIF4A se han vinculado con señalización oncogénica, fenotipos del neurodesarrollo y desregulación de la respuesta al estrés, lo que convierte a Eif4a1 en un nodo relevante para estudios mecanísticos del control traduccional.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO eIF4AI (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Eif4a1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Eif4a1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Eif4a1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína eIF4AI.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Eif4a1 para la investigación de la señalización de eIF4AI, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Eif4a1 críticos para la función de eIF4AI
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Eif4a1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido eIF4AI CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido eIF4AI CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Eif4a1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR eIF4AI (m) y el plásmido HDR eIF4AI (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Eif4a1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Eif4a1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.