eIF3η Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400817-ACT

EIF3B codifica a subunidade eta do fator eucariótico de iniciação da tradução 3 (eIF3η), um componente central do complexo eIF3 que coordena a montagem do complexo de pré-iniciação 43S e promove o recrutamento de mRNA para a subunidade ribossômica 40S. Por meio da regulação da iniciação da tradução, o EIF3B influencia a remodelação do proteoma durante o crescimento celular, as respostas ao estresse e a progressão do ciclo celular, além de integrar sinais que moldam a síntese proteica global e seletiva por transcrito. A desregulação do controle translacional envolvendo subunidades do eIF3 tem sido associada a programas de proliferação alterados e à transformação celular, tornando o EIF3B um alvo útil para estudar o carregamento de ribossomos, a seletividade de mRNAs e a proteostase. Pesquisadores investigam comumente o EIF3B para relacionar mudanças na função de fatores de iniciação a alterações, em nível de via, nos resultados da expressão gênica.

eIF3η O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EIF3B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

eIF3η O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EIF3B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EIF3B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de eIF3η. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EIF3B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de eIF3η no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via eIF3η em células tumorais com expressão de EIF3B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.