Plásmido Doble Nickase (h) EIF2D: sc-405379-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)EIF2D consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa EIF2D (h) y el plásmido de doble nickasa EIF2D (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a EIF2D. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: eIF2D Anticuerpo (2D10): sc-293396
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) EIF2D | sc-405379-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) EIF2D | sc-405379-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EIF2D codifica el factor eucariota de iniciación de la traducción 2D, un factor de iniciación no canónico implicado en la iniciación alternativa de la traducción y en la entrega de ARNt al sitio P ribosomal en contextos celulares específicos. A través de su papel en el control de la traducción, EIF2D se cruza con vías que regulan la proteostasis y las respuestas adaptativas al estrés celular, incluidos módulos vinculados a la señalización de eIF2 y a la dinámica de la respuesta integrada al estrés. La alteración de la iniciación de la traducción y de la síntesis proteica adaptativa al estrés es ampliamente relevante para mecanismos estudiados en la neurodegeneración, la plasticidad de células cancerosas y modelos de infección viral, donde los programas de traducción alterados pueden remodelar las transiciones de estado celular. Como resultado, EIF2D se investiga con frecuencia para entender cómo los cambios en el uso de factores de iniciación influyen en la traducción específica de ARNm y en los fenotipos posteriores.
EIF2D El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EIF2D en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EIF2D. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EIF2D. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EIF2D alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.