Partículas Lentivirales de Activación (m) EGFR: sc-420131-LAC

El Egfr de ratón codifica el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR), una tirosina quinasa receptora que regula la proliferación, la supervivencia, la migración y la diferenciación mediante la dimerización inducida por ligando y la autofosforilación. EGFR señaliza a través de las vías canónicas MAPK/ERK, PI3K–AKT–mTOR, JAK/STAT y PLCγ–PKC, coordinando la progresión del ciclo celular y las respuestas al estrés. En modelos murinos, la actividad alterada de EGFR perturba la homeostasis epitelial y los programas del desarrollo, y se utiliza ampliamente para estudiar la desregulación de la señalización del crecimiento relevante para la transformación oncogénica y la remodelación tisular. Las redes dependientes de EGFR también se entrecruzan con el tráfico endocítico, la inhibición por retroalimentación y el crosstalk con otras RTK, lo que convierte a Egfr en un nodo clave para el mapeo de vías.

Las partículas de activación lentiviral EGFR (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Egfr en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral EGFR (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Egfr, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de EGFR. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Egfr y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.