Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
EFP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402678
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- EFP El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico EFP, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: EFP Anticuerpo (E-4): sc-166926
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
EFP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-402678 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
TRIM25 codifica la ligasa E3 de ubiquitina EFP, una proteína de la familia TRIM que cataliza eventos de ubiquitinación que controlan la señalización inmunitaria innata y el metabolismo del ARN. EFP promueve respuestas antivirales al ubiquitinar y activar RIG-I, facilitando la señalización posterior de interferón de tipo I a través de MAVS, TBK1 e IRF3/7, y puede modular las respuestas inflamatorias asociadas a NF-κB. Más allá de la defensa del huésped, TRIM25 participa en la regulación postranscripcional mediante interacciones con proteínas de unión a ARN e influye en programas del ciclo celular y de respuesta al estrés. La actividad desregulada de TRIM25 se ha vinculado con cambios en el tono de interferón, la susceptibilidad a virus y funciones dependientes del contexto en la biología tumoral y la señalización endocrina, lo que la convierte en un nodo relevante en la investigación sobre inflamación y cáncer.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO EFP (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TRIM25 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TRIM25 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TRIM25 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína EFP.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TRIM25 para la investigación de la señalización de EFP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de TRIM25 críticos para la función de EFP
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TRIM25 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido EFP CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido EFP CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TRIM25. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR EFP (h) y el plásmido HDR EFP (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TRIM25 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TRIM25 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.