ECM2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-436571-ACT

O gene Ecm2 de camundongo codifica a proteína 2 da matriz extracelular (ECM2), um componente secretado associado à matriz, implicado na organização da arquitetura do estroma e na modulação das interações célula–matriz. A ECM2 contribui para processos de remodelação da matriz extracelular que influenciam a adesão celular, a migração e a morfogênese tecidual, interagindo com vias que regulam a atividade de fibroblastos e a integridade da membrana basal. Alterações na composição da MEC e na dinâmica da matriz ligada à ECM2 são relevantes para estudos de remodelação do tipo fibrótica, reparo de feridas e biologia do microambiente tumoral, nos quais sinais do estroma moldam fenótipos celulares. Assim, a expressão de Ecm2 é frequentemente investigada em modelos de homeostase do tecido conjuntivo e de alterações no meio extracelular associadas à inflamação.

ECM2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Ecm2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ECM2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Ecm2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Ecm2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ECM2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Ecm2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ECM2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ECM2 em células tumorais com expressão de Ecm2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.