EBF2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402456-ACT

EBF2（early B-cell factor 2）は、特定のDNAモチーフに結合して転写を制御するヘリックス・ループ・ヘリックス型の転写因子であり、ヒトの発生における系譜指定や分化プログラムの調節に関与します。EBF2は、代謝関連遺伝子の発現や細胞運命の決定を制御する転写ネットワークを統括することで、脂肪細胞の生物学、神経分化、ならびに骨形成経路において重要な役割を果たします。EBF2の活性はクロマチンリモデリングやエンハンサーの選択と連動して安定した転写状態の維持に寄与し、その機能異常は脂肪組織の熱産生プログラムの変化、神経発達に関する表現型、さらにはがんに関連する転写のリプログラミングと関連づけられています。組織特異的遺伝子発現の結節点となる制御因子として、EBF2はエピジェネティック制御、代謝恒常性、分化に連動したシグナル伝達カスケードの文脈で頻繁に研究されています。

EBF2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EBF2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

EBF2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EBF2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEBF2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性EBF2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEBF2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEBF2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEBF2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEBF2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。