dystrophin Double Nickase Plasmid (m): sc-420021-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das dystrophin Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- dystrophin Double-Nickase-Plasmid (m) und dystrophin Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Dmd abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: dystrophin: sc-47760
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
dystrophin Double Nickase Plasmid (m) | sc-420021-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
dystrophin Double Nickase Plasmid (m2) | sc-420021-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen *Dmd* kodiert Dystrophin, ein großes zytoskelettales Gerüstprotein, das das Aktinzytoskelett mit dem dystrophinassoziierten Glykoproteinkomplex an der Sarkolemmmembran verbindet. Diese Verknüpfung stabilisiert die Membranen von Muskelfasern während der Kontraktion und unterstützt Mechanotransduktion, Ionenhomöostase sowie die Organisation von Costameren und der Architektur der neuromuskulären Endplatte. Der Verlust oder eine Funktionsstörung von Dystrophin beeinträchtigt die Membranintegrität und verändert nachgeschaltete Signalwege sowie entzündliche Umbauprozesse in Skelett- und Herzmuskel, wodurch *Dmd* ein zentrales Gen für die Modellierung muskulardystrophierelevanter Biologie in vivo und in kultivierten Myotuben ist. Studien zu *Dmd* überschneiden sich häufig mit Signalwegen, die den Turnover der extrazellulären Matrix, den Calciumhaushalt und Stressantwort-Signalisierung in quergestreifter Muskulatur steuern.
dystrophin Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Dmd-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Dmd abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Dmd-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Dmd-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.