Plásmido CRISPR de Activación (h) Dynamin II: sc-401037-ACT

DNM2 codifica la dinamina II humana, una GTPasa de gran tamaño que cataliza la fisión de membrana durante la endocitosis mediada por clatrina y otros eventos de tráfico vesicular. La dinamina II se coordina con la remodelación de actina, las proteínas con dominio BAR y los complejos adaptadores para regular la internalización de receptores, el reciclaje de vesículas sinápticas y la clasificación endosomal, dando forma así a las respuestas de señalización y a la homeostasis de la membrana. A través de sus funciones en la dinámica de membranas, DNM2 influye en procesos como la citocinesis y la distribución de orgánulos, vinculando el control endocítico con aspectos más amplios de la fisiología celular. La actividad o regulación alterada de DNM2 se asocia con fenotipos neuromusculares y del neurodesarrollo, y se investiga con frecuencia por su impacto en el tráfico de receptores y la modulación de vías aguas abajo.

Dynamin II El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DNM2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Dynamin II El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DNM2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DNM2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Dynamin II. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DNM2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Dynamin II en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Dynamin II en células tumorales con expresión de DNM2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.