Plásmido Doble Nickase (h) DTWD1: sc-416659-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)DTWD1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa DTWD1 (h) y el plásmido de doble nickasa DTWD1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a DTWD1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: DTWD1 Anticuerpo (E-5): sc-398408
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) DTWD1 | sc-416659-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) DTWD1 | sc-416659-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DTWD1 codifica una proteína conservada que contiene un dominio DTW, implicada en el metabolismo del ARN, con funciones propuestas en la modificación del ARNt y en procesos más amplios de modificación del ARN que pueden influir en la fidelidad de la traducción y en la proteostasis. Aunque DTWD1 no está completamente caracterizada, las proteínas con dominio DTW suelen asociarse a actividades de modificación de nucleótidos y a la coordinación de vías de procesamiento del ARN en el citoplasma y el núcleo. La alteración de la modificación del ARN y del control de la traducción puede remodelar la progresión del ciclo celular y la señalización de respuesta al estrés, lo que hace que DTWD1 sea relevante para estudios sobre la regulación de la expresión génica y la homeostasis celular. Se han descrito cambios en la expresión de DTWD1 en conjuntos de datos transcriptómicos en múltiples contextos de enfermedad, lo que respalda su uso como gen candidato en investigaciones de genómica mecanística.
DTWD1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DTWD1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DTWD1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DTWD1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DTWD1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.