DTWD1 Plasmide Double Nickase (h): sc-416659-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DTWD1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DTWD1 Double Nickase Plasmid (h) e il DTWD1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DTWD1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DTWD1 Antibody (E-5): sc-398408
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DTWD1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-416659-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DTWD1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-416659-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DTWD1 codifica una proteina conservata contenente un dominio DTW implicata nel metabolismo dell’RNA, con ruoli proposti nella modificazione dei tRNA e in processi più ampi di modificazione dell’RNA che possono influenzare la fedeltà della traduzione e la proteostasi. Sebbene DTWD1 non sia completamente caratterizzata, le proteine con dominio DTW sono comunemente associate ad attività di modificazione dei nucleotidi e al coordinamento delle vie di processamento dell’RNA nel citoplasma e nel nucleo. L’alterazione della modificazione dell’RNA e del controllo della traduzione può rimodellare la progressione del ciclo cellulare e la segnalazione della risposta allo stress, rendendo DTWD1 rilevante per studi sulla regolazione dell’espressione genica e sull’omeostasi cellulare. Un’espressione alterata di DTWD1 è stata riportata in dataset trascrittomici in molteplici contesti patologici, supportandone l’uso come gene candidato in indagini di genomica meccanicistica.
DTWD1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DTWD1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DTWD1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DTWD1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DTWD1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.