Plasmide Double Nickase (h) dsg3: sc-401809-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) dsg3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide dsg3 Double Nickase (h) et le plasmide dsg3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant DSG3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: dsg3 Antibody (5H10): sc-23912
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) dsg3 | sc-401809-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) dsg3 | sc-401809-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La desmogléine 3 (DSG3 ; dsg3) est une cadhérine desmosomale dépendante du calcium qui assure une forte adhérence cellule–cellule dans les épithéliums stratifiés grâce à des interactions trans et à son association avec la plakoglobine, les plakophilines et la desmoplakine, couplant ainsi les complexes d’adhérence aux filaments intermédiaires. En stabilisant l’assemblage et le remodelage des desmosomes, DSG3 contribue à l’intégrité de la barrière épithéliale, à la morphogenèse tissulaire et aux réponses au stress mécanique, avec des effets en aval sur l’organisation du cytosquelette et la signalisation régulée par les contacts. Une perturbation de l’adhérence dépendante de DSG3 est associée à une perte de cohésion épithéliale et à des programmes de différenciation altérés. DSG3 est également largement utilisée comme marqueur de la lignée épithéliale et de la biologie des desmosomes dans les études de l’homéostasie des tissus cutanés et muqueux.
dsg3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DSG3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DSG3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DSG3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DSG3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.