Plasmide CRISPR/Cas9 KO DSCR 1 (h): sc-402694

Présentation

RCAN1 (DSCR1) code une protéine interagissant avec la calcineurine, qui agit comme régulateur endogène de la signalisation dépendante du Ca2+ en modulant l’activité phosphatase de la calcineurine. Par cette interaction, DSCR1 influence des programmes transcriptionnels pilotés par NFAT, qui gouvernent les réponses au stress, la croissance cellulaire et la différenciation, et s’inscrit aussi à l’interface des voies MAPK et du stress oxydatif. L’expression de RCAN1 répond aux stresseurs cellulaires et à la signalisation par les cytokines, ce qui l’associe à un contrôle dynamique des sorties transcriptionnelles dans de nombreux tissus. Une activité dérégulée de RCAN1 a été liée à des phénotypes neurodéveloppementaux ainsi qu’à des altérations de la signalisation vasculaire et immunitaire, offrant un levier mécanistique pour étudier les déséquilibres de voies dans des contextes pertinents pour la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DSCR 1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RCAN1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RCAN1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RCAN1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DSCR 1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RCAN1 pour l'étude de la signalisation de DSCR 1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RCAN1 essentiels à la fonction de DSCR 1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RCAN1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DSCR 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DSCR 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RCAN1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DSCR 1 plasmide HDR (h) et le DSCR 1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RCAN1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RCAN1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.