DPPX Plasmide Double Nickase (h): sc-403662-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DPPX Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DPPX Double Nickase Plasmid (h) e il DPPX Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DPP6. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DPPX Antibody (A-8): sc-365147
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DPPX Plasmide Double Nickase (h) | sc-403662-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DPPX Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403662-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DPP6 codifica la proteina 6 simile alla dipeptidil peptidasi (DPPX), un membro enzimaticamente inattivo della famiglia DPP che funziona come subunità ausiliaria dei canali del potassio voltaggio-dipendenti, in particolare dei complessi Kv4. Modulando l’apertura/chiusura del canale, il traffico intracellulare e l’espressione in superficie, DPPX influenza l’eccitabilità dendritica, la ripolarizzazione del potenziale d’azione e l’integrazione sinaptica nei neuroni, collegandosi alla segnalazione dipendente dall’attività e all’omeostasi dei circuiti neurali. Alterazioni dell’espressione di DPP6/DPPX o variazioni genetiche sono state associate a fenotipi neuroevolutivi e neuropsichiatrici, nonché a una maggiore suscettibilità a disturbi legati all’iper-eccitabilità neuronale, rendendolo rilevante per lo studio della regolazione dei canali ionici e della funzione cerebrale.
DPPX Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DPP6 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DPP6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DPP6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DPP6 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.