DPEP1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407451

Descripción general

DPEP1 (dipeptidasa 1) codifica una metaloproteasa de zinc anclada a la membrana, localizada predominantemente en la superficie apical de las células epiteliales, donde hidroliza una variedad de dipéptidos y metabolitos conjugados con glutatión. A través de su actividad enzimática, DPEP1 contribuye al recambio de péptidos y al metabolismo de xenobióticos, intersectando con procesos de desintoxicación dependientes de glutatión y con funciones de transporte epitelial. Se han descrito cambios en la expresión de DPEP1 en múltiples neoplasias derivadas de epitelio y en contextos inflamatorios, lo que vincula a esta enzima con la remodelación del microambiente pericelular y con un manejo metabólico alterado. Como ectoenzima con motivos catalíticos definidos, DPEP1 constituye un nodo abordable para estudiar la biología de proteasas de membrana, las respuestas al estrés metabólico y los estados de diferenciación epitelial.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DPEP1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DPEP1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DPEP1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DPEP1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DPEP1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DPEP1 para la investigación de la señalización de DPEP1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DPEP1 críticos para la función de DPEP1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DPEP1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DPEP1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido DPEP1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DPEP1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DPEP1 (h) y el plásmido HDR DPEP1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DPEP1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DPEP1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.