Plásmido Doble Nickase (h) DHCR24: sc-405507-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)DHCR24 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa DHCR24 (h) y el plásmido de doble nickasa DHCR24 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a DHCR24. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: DHCR24 Anticuerpo (A-4): sc-398938
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) DHCR24 | sc-405507-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) DHCR24 | sc-405507-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DHCR24 codifica la 24-dehidrocolesterol reductasa, una enzima del retículo endoplásmico que cataliza el paso final de la biosíntesis de colesterol al reducir el desmosterol a colesterol. A través de su papel en la vía de Bloch, DHCR24 influye en la composición de esteroles de la membrana, la organización de las balsas lipídicas y las redes de señalización sensibles a esteroles que se entrecruzan con la homeostasis del RE y las respuestas al estrés oxidativo. La alteración de la actividad de DHCR24 puede desplazar el equilibrio desmosterol/colesterol, afectando la diferenciación celular y la adaptación metabólica en contextos dependientes de esteroles. Se han descrito cambios en la expresión o la función de DHCR24 en trastornos del metabolismo del colesterol, y se ha estudiado en modelos de neurodegeneración y oncología por sus vínculos con la resiliencia al estrés y la remodelación lipídica.
DHCR24 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DHCR24 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DHCR24. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DHCR24. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DHCR24 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.