desmoplakin I/II Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400818

Visão geral

DSP codifica a desmoplaquina I/II, um componente central da família plakin dos desmossomas, que ancora filamentos intermediários a complexos juncionais baseados em caderinas, sustentando assim o acoplamento mecânico entre células adjacentes. Ao ligar complexos desmogleína/desmocolina–plakoglobina/plakofilina a redes de queratina ou desmina, a desmoplaquina ajuda a coordenar a integridade de tecidos epiteliais e cardíacos e regula a remodelação juncional durante a diferenciação e respostas ao stress associado a feridas. A perturbação de DSP desorganiza o citoesqueleto, a adesão célula–célula e a sinalização mecanorresponsiva, com relevância estabelecida para doenças hereditárias e adquiridas que afetam a epiderme e o miocárdio. Essas características tornam o DSP um alvo útil para estudar a estabilidade das junções, a comunicação cruzada do citoesqueleto e vias de remodelação induzidas por stress.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO desmoplakin I/II (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene DSP em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do DSP, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do DSP na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína desmoplakin I/II.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de DSP para a investigação da sinalização de desmoplakin I/II, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) DSP críticos para a função desmoplakin I/II
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos DSP para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo desmoplakin I/II Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo desmoplakin I/II Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus DSP. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo desmoplakin I/II Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR desmoplakin I/II (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia DSP para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo DSP definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.