Plásmido Doble Nickase (h) DDX3X: sc-401253-NIC

DDX3X codifica una helicasa de ARN tipo DEAD-box dependiente de ATP que coordina múltiples etapas del metabolismo del ARN, entre ellas el empalme (splicing) del pre-ARNm, la exportación de ARNm, el inicio de la traducción y la dinámica de los gránulos de estrés. Mediante la remodelación de complejos ARN–proteína, DDX3X integra señales que afectan la progresión del ciclo celular, la detección inmunitaria innata y las respuestas celulares al estrés. La desregulación o las mutaciones en DDX3X se han vinculado con fenotipos del neurodesarrollo y se han observado de forma recurrente en diversos contextos de cáncer, lo que refleja su amplia influencia sobre el procesamiento del ARN y la proteostasis. Estas propiedades convierten a DDX3X en un nodo útil para estudiar la función de las helicasas de ARN, el control de la traducción y las vías que acoplan la regulación del ARN con la proliferación y la adaptación al estrés.

DDX3X El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DDX3X en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DDX3X. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DDX3X. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DDX3X alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.