Plásmido CRISPR de Activación (h) DDX27: sc-409574-ACT

DDX27 codifica una helicasa de ARN tipo DEAD-box nucleolar que participa en el procesamiento del pre-ARNr y en la biogénesis ribosomal, favoreciendo el ensamblaje eficiente de las subunidades ribosomales grandes y la capacidad global de traducción. Al remodelar complejos ARN–proteína en el nucleolo, DDX27 contribuye a la regulación de programas de crecimiento y proliferación celular que dependen de una síntesis proteica estrechamente controlada. La alteración de la producción de ribosomas y de la homeostasis nucleolar se ha vinculado con la señalización de estrés celular y con cambios en la diferenciación, lo que hace que DDX27 sea relevante para estudios de ribosomopatías y de la reprogramación de la traducción asociada al cáncer. La actividad aberrante de DDX27 se ha asociado con fenotipos proliferativos y con defectos en procesos miogénicos y del desarrollo en sistemas modelo, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en la investigación del metabolismo del ARN.

DDX27 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DDX27 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DDX27 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DDX27 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DDX27, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DDX27. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DDX27 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DDX27 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DDX27 en células tumorales con expresión de DDX27 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.