Plásmido Doble Nickase (h) DCC: sc-401035-NIC

DCC (deleted in colorectal carcinoma) codifica un receptor de netrina-1 de la superfamilia de las inmunoglobulinas que regula la guía axonal, la migración neuronal y la remodelación del citoesqueleto a través de vías que incluyen la señalización por GTPasas de la familia Rho y la dinámica de las adhesiones focales. En ausencia de ligando, DCC puede funcionar como un receptor de dependencia que influye en la apoptosis y la supervivencia celular, conectando la detección de señales extracelulares con decisiones de señalización intracelular. Más allá del neurodesarrollo, DCC contribuye a la adhesión celular y a la migración dirigida en diversos tejidos, y la expresión alterada de DCC o su disrupción genómica se ha asociado con la progresión tumoral, fenotipos de invasión y anomalas del neurodesarrollo. Estas características hacen de DCC una diana útil para estudios mecanísticos de la señalización por señales de guía, la morfogénesis y cambios relevantes para la enfermedad en los programas de motilidad y supervivencia celular.

DCC El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DCC en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DCC. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DCC. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DCC alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.