Plásmido CRISPR de Activación (h) DCC: sc-401035-ACT

DCC (deleted in colorectal carcinoma) codifica un receptor de netrina-1 y un receptor de dependencia que coordina la guía axonal, la migración neuronal y la remodelación del citoesqueleto mediante señales de la matriz extracelular. Además de su papel en la neurobiología del desarrollo, la señalización de DCC se conecta con vías que controlan la adhesión celular, la polaridad y la apoptosis, con efectos posteriores sobre la dinámica de las GTPasas Rho y procesos asociados a MAPK/PI3K. La alteración de la expresión o la función de DCC se ha relacionado con una formación disruptiva de circuitos neuronales y con la biología tumoral, donde los cambios en la señalización netrina–DCC pueden influir en las señales de supervivencia, la invasión y comportamientos similares a la transición epitelio–mesénquima. Estas características hacen de DCC humano una diana valiosa para estudiar la transducción de señales de guía, las interacciones célula–célula y las respuestas apoptóticas dependientes del contexto.

DCC El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DCC sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DCC El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DCC en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DCC, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DCC. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DCC y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DCC en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DCC en células tumorales con expresión de DCC silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.