Plásmido CRISPR de Activación (h) DCBLD1: sc-404343-ACT

DCBLD1 (discoidin, CUB and LCCL domain containing 1) codifica una proteína transmembrana de paso único implicada en la comunicación célula–célula y célula–matriz mediante interacciones mediadas por su dominio extracelular. DCBLD1 humano se ha vinculado con la regulación de redes de señalización que influyen en la adhesión, la motilidad y las vías asociadas a receptores tirosina quinasa, lo que respalda funciones en la remodelación del citoesqueleto y en programas transcripcionales dependientes del contexto. Se ha informado de una expresión alterada de DCBLD1 en conjuntos de datos que abarcan múltiples tipos tumorales y fenotipos asociados al sistema vascular, lo que sugiere relevancia para procesos como la invasión, la migración relacionada con la metástasis y la remodelación tisular. Estas propiedades hacen de DCBLD1 un objetivo útil para estudios mecanísticos que conectan la señalización de receptores de superficie con la activación de vías aguas abajo y las transiciones de estado celular.

DCBLD1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DCBLD1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DCBLD1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DCBLD1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DCBLD1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DCBLD1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DCBLD1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DCBLD1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DCBLD1 en células tumorales con expresión de DCBLD1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.