Plásmido Doble Nickase (h) DBH: sc-402441-NIC

La dopamina beta-hidroxilasa (DBH) es una monooxigenasa dependiente de cobre que cataliza la conversión de dopamina en noradrenalina dentro de las vesículas secretoras de las neuronas simpáticas y de las células cromafines de la médula suprarrenal. Al controlar el equilibrio dopamina:noradrenalina, la DBH influye en la biosíntesis de catecolaminas, la neurotransmisión adrenérgica y la señalización neuroendocrina sensible al estrés. La actividad de la DBH se cruza con vías del metabolismo de la tirosina y del manejo vesicular de monoaminas, modulando la señalización posterior de los receptores adrenérgicos y las respuestas vinculadas a nucleótidos cíclicos. La variación genética y regulatoria en DBH se ha asociado con trastornos de la función autonómica y con fenotipos neuropsiquiátricos, lo que la convierte en una diana relevante para estudios mecanísticos de la homeostasis de las catecolaminas.

DBH El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DBH en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DBH. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DBH. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DBH alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.