Plásmido Doble Nickase (h) DAP-5: sc-405901-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)DAP-5 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa DAP-5 (h) y el plásmido de doble nickasa DAP-5 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a EIF4G2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: DAP-5 Anticuerpo (F-2): sc-137011
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) DAP-5 | sc-405901-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) DAP-5 | sc-405901-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EIF4G2 codifica DAP-5 (también conocido como eIF4G2/NAT1), un andamiaje no canónico de iniciación de la traducción que favorece la traducción de ARNm independiente del cap y dependiente de IRES, en particular cuando la actividad de eIF4F es limitada. DAP-5 contribuye al control translacional durante las respuestas al estrés celular, la apoptosis y la diferenciación al coordinar interacciones con factores de iniciación y el reclutamiento selectivo de ARNm. A través de estos mecanismos, EIF4G2 influye en la proteostasis y en programas de señalización que remodelan la expresión génica a nivel de la traducción. La desregulación de la reprogramación translacional vinculada a EIF4G2 se ha investigado en contextos como la supervivencia de células tumorales, procesos del neurodesarrollo y fenotipos de adaptación al estrés, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de la regulación del ARN.
DAP-5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EIF4G2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EIF4G2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EIF4G2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EIF4G2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.