Plásmido CRISPR de Activación (h) DAAO: sc-402772-ACT

El gen humano **DAO** codifica la **oxidasa de D‑aminoácidos (DAAO)**, una flavoproteína peroxisomal que cataliza la desaminación oxidativa de D‑aminoácidos neutros, generando los correspondientes iminoácidos, peróxido de hidrógeno y amoníaco. Al regular los niveles de D‑serina y metabolitos relacionados, la DAAO influye en la disponibilidad del coagonista de los receptores NMDA y conecta el metabolismo de aminoácidos con el equilibrio redox mediante el manejo, asociado a peroxisomas, de especies reactivas de oxígeno. Este eje se entrecruza con la neurotransmisión, las respuestas celulares al estrés oxidativo y la homeostasis metabólica en el cerebro y en tejidos periféricos. La actividad o expresión alteradas de DAAO se han investigado en el contexto de la biología de enfermedades neuropsiquiátricas y neurodegenerativas, así como en modelos más amplios de daño oxidativo y desregulación metabólica.

DAAO El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DAO sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DAAO El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DAO en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DAO, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DAAO. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DAO y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DAAO en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DAAO en células tumorales con expresión de DAO silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.