Cytokeratin 6A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401650

Descripción general

KRT6A codifica la citoqueratina 6A, una proteína de filamento intermedio de tipo II que forma heterodímeros con queratinas de tipo I para constituir el citoesqueleto de queratina en epitelios estratificados. La citoqueratina 6A contribuye a la resistencia mecánica, coordina la remodelación del citoesqueleto durante la reparación de heridas y se relaciona con la organización de las uniones celulares y con programas de respuesta al estrés que modulan la diferenciación epitelial. Su expresión se induce con frecuencia en queratinocitos hiperproliferativos, lo que vincula a KRT6A con vías que regulan la regeneración epitelial y el mantenimiento de la barrera. La desregulación de la queratina 6A está implicada en trastornos de queratinización hereditarios y adquiridos, y se observa comúnmente en contextos de tumores epiteliales, por lo que resulta relevante para estudiar la plasticidad epitelial y los cambios del citoesqueleto asociados a enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Cytokeratin 6A (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen KRT6A en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del KRT6A junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de KRT6A tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Cytokeratin 6A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en KRT6A para la investigación de la señalización de Cytokeratin 6A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de KRT6A críticos para la función de Cytokeratin 6A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de KRT6A para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Cytokeratin 6A CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Cytokeratin 6A CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus KRT6A. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Cytokeratin 6A (h) y el plásmido HDR Cytokeratin 6A (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología KRT6A para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana KRT6A definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.