Plasmide CRISPR d'Activation (h) CyPB: sc-401888-ACT

PPIB code la cyclophiline B (CyPB), une isomérase peptidyl‑prolyl cis‑trans localisée dans le réticulum endoplasmique, qui accélère le repliement des protéines et soutient la protéostasie de la voie de sécrétion. CyPB participe au contrôle qualité du RE et aux réponses au stress, notamment via la coordination des réseaux de chaperonnes et la modulation de processus dépendants du calcium qui influencent l’homéostasie cellulaire. Grâce à son activité isomérase et à ses interactions avec des substrats en cours de repliement, PPIB relie la maturation des protéines à des voies impliquées dans la production de matrice extracellulaire, la signalisation inflammatoire et les décisions de survie cellulaire. Une activité ou une expression dérégulée de PPIB/CyPB a été associée à des contextes pathologiques impliquant une prise en charge anormale des protéines, une activation immunitaire et un remodelage tissulaire, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques dans des modèles de maladie.

CyPB Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PPIB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CyPB Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PPIB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PPIB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CyPB. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PPIB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CyPB au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CyPB dans les cellules tumorales présentant une expression de PPIB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.