Plásmido CRISPR de Activación (h) CYP4F8: sc-411598-ACT

El gen humano **CYP4F8** codifica una monooxigenasa del citocromo P450 que contribuye al metabolismo oxidativo de mediadores derivados de ácidos grasos, apoyando la regulación de la señalización lipídica local y el procesamiento de xenobióticos. Como parte de la familia más amplia **CYP4**, **CYP4F8** se asocia con reacciones de **ω-hidroxilación** que pueden influir en el recambio de eicosanoides y el tono inflamatorio, conectándose con vías que gobiernan la homeostasis epitelial y las respuestas celulares al estrés. La variación en la actividad y la expresión de CYP450 se investiga con frecuencia en el contexto de las diferencias interindividuales en el metabolismo y la susceptibilidad a fenotipos asociados a la inflamación, lo que convierte a **CYP4F8** en una diana útil en estudios mecanísticos. Los modelos in vitro que aprovechan la modulación de **CYP4F8** pueden ayudar a aclarar cómo el metabolismo de mediadores lipídicos moldea redes de señalización relevantes para la fisiología específica de cada tejido.

CYP4F8 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CYP4F8 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CYP4F8 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CYP4F8 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CYP4F8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CYP4F8. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CYP4F8 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CYP4F8 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CYP4F8 en células tumorales con expresión de CYP4F8 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.