Plásmido Doble Nickase (h) CYP3A5: sc-401306-NIC

CYP3A5 codifica una monooxigenasa del citocromo P450 que cataliza el metabolismo oxidativo de diversos xenobióticos y sustratos endógenos, contribuyendo a la biotransformación de fase I en el retículo endoplásmico. Como parte de las redes de enzimas metabolizadoras de fármacos hepáticas y extrahepáticas, CYP3A5 influye en vías que regulan la homeostasis de esteroides y lípidos, así como la eliminación de sustancias químicas ambientales. La variación interindividual en la expresión y la actividad de CYP3A5 es un determinante importante del fenotipo metabólico y puede modificar la exposición a sustratos de CYP3A en modelos celulares y de organoides. El metabolismo dependiente de CYP3A5 desregulado se ha investigado en contextos como la susceptibilidad a tóxicos y los cambios asociados a enfermedad en la función hepática y en programas transcripcionales relacionados con la inflamación.

CYP3A5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CYP3A5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CYP3A5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CYP3A5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CYP3A5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.