CYP2D6 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404098-ACT

CYP2D6 kodiert Cytochrom P450 2D6, eine mikrosomale Monooxygenase, die im endoplasmatischen Retikulum die oxidative Biotransformation eines breiten Spektrums endogener Substrate und Xenobiotika katalysiert. Als Teil des Cytochrom-P450-abhängigen Stoffwechselnetzwerks beeinflusst CYP2D6 Redoxzyklen und den NADPH-abhängigen Elektronentransfer über die CYP450-Reduktase und prägt damit die zelluläre Exposition gegenüber bioaktiven Metaboliten. Genetische Variation und kontextabhängige Expression von CYP2D6 sind wesentliche Determinanten interindividueller Unterschiede im Arzneistoffmetabolismus und in der Chemikalienempfindlichkeit. Eine dysregulierte CYP2D6-Aktivität ist daher relevant für pharmakogenomische Studien, die Toxikologie und mechanistische Modelle der metabolischen Aktivierung und Clearance.

CYP2D6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CYP2D6-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CYP2D6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CYP2D6-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CYP2D6-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CYP2D6-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CYP2D6-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CYP2D6-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CYP2D6-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CYP2D6-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.