Plasmide CRISPR d'Activation (h) CYP21A2: sc-402919-ACT

CYP21A2 code la 21‑hydroxylase du cytochrome P450, une monooxygénase associée au réticulum endoplasmique, indispensable à la stéroïdogenèse surrénalienne. En catalysant les étapes de 21‑hydroxylation dans la biosynthèse des précurseurs du cortisol et de l’aldostérone, CYP21A2 contribue à réguler les voies des glucocorticoïdes et des minéralocorticoïdes qui déterminent l’équilibre électrolytique et la signalisation endocrinienne en réponse au stress. Une expression ou une activité modifiée de CYP21A2 perturbe le flux des hormones stéroïdiennes au sein du cortex surrénalien, influençant les programmes transcriptionnels en aval contrôlés par les récepteurs nucléaires des hormones. La dérégulation de ce gène est fortement associée aux phénotypes d’hyperplasie congénitale des surrénales et fait l’objet de nombreuses études en génétique endocrinienne et en recherche sur le métabolisme des stéroïdes.

CYP21A2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CYP21A2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CYP21A2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CYP21A2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CYP21A2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CYP21A2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CYP21A2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CYP21A2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CYP21A2 dans les cellules tumorales présentant une expression de CYP21A2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.