cyclin D1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400047-ACT

CCND1 codifica a ciclina D1, um regulador central da transição G1/S do ciclo celular, que se liga e ativa CDK4/6 para promover a fosforilação de proteínas da família RB e a liberação da transcrição dirigida por E2F. Por meio da integração de sinais mitogênicos de vias como MAPK/ERK e PI3K/AKT, a ciclina D1 coordena estímulos proliferativos com a entrada no ciclo celular e contribui para o controle da replicação do DNA e das respostas de checkpoint. A expressão desregulada ou a amplificação de CCND1 está frequentemente associada à proliferação aberrante e à instabilidade genômica em diversos cânceres, e a atividade alterada da ciclina D1 também tem sido ligada a mudanças em programas de diferenciação e no metabolismo celular. Como um nó do ciclo celular responsivo à transcrição, CCND1 é amplamente utilizado para investigar o acoplamento entre sinalização e proliferação e as dependências de vias oncogênicas em modelos celulares humanos.

cyclin D1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CCND1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

cyclin D1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CCND1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CCND1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de cyclin D1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CCND1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de cyclin D1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via cyclin D1 em células tumorais com expressão de CCND1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.