Plásmido CRISPR de Activación (h) cyclin D1: sc-400047-ACT

CCND1 codifica la ciclina D1, un regulador central de la transición del ciclo celular G1/S que se une y activa a CDK4/6 para promover la fosforilación de las proteínas de la familia RB y la liberación de la transcripción impulsada por E2F. Mediante la integración de señales mitogénicas de vías como MAPK/ERK y PI3K/AKT, la ciclina D1 coordina las señales proliferativas con la entrada al ciclo celular y contribuye al control de la replicación del ADN y de las respuestas de los puntos de control. La expresión desregulada o la amplificación de CCND1 se asocia con frecuencia a proliferación aberrante e inestabilidad genómica en diversos cánceres, y la actividad alterada de la ciclina D1 también se ha vinculado a cambios en programas de diferenciación y en el metabolismo celular. Como nodo del ciclo celular con regulación transcripcional, CCND1 se utiliza ampliamente para investigar el acoplamiento entre la señalización y la proliferación, así como las dependencias de vías oncogénicas en modelos celulares humanos.

cyclin D1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CCND1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

cyclin D1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CCND1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CCND1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de cyclin D1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CCND1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de cyclin D1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía cyclin D1 en células tumorales con expresión de CCND1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.