cyclin C Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402308

Descripción general

CCNC codifica la ciclina C, una ciclina conservada que se asocia principalmente con CDK8 y quinasas relacionadas dentro del complejo Mediator para modular la transcripción dependiente de la ARN polimerasa II. A través de la señalización de la quinasa de Mediator, la ciclina C ayuda a integrar señales de MAPK, Wnt/β-catenina y otras vías sensibles al estrés para coordinar el control del ciclo celular, los programas de diferenciación y las respuestas transcripcionales adaptativas. La ciclina C también se ha relacionado con la dinámica mitocondrial y la señalización del estrés oxidativo, lo que refleja su papel en la interfaz entre la transcripción nuclear y la homeostasis celular. La desregulación del control transcripcional mediado por CCNC se ha asociado con alteraciones de la proliferación y de los programas de expresión génica observadas en el cáncer y otros trastornos que implican señalización y respuestas al estrés aberrantes.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO cyclin C (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CCNC en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CCNC junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CCNC tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína cyclin C.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CCNC para la investigación de la señalización de cyclin C, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CCNC críticos para la función de cyclin C
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CCNC para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido cyclin C CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido cyclin C CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CCNC. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR cyclin C (h) y el plásmido HDR cyclin C (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CCNC para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CCNC definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.