CUG-BP2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403267

Panoramica

CELF2 (CUG-BP2) è una proteina legante l’RNA della famiglia CELF che coordina la regolazione genica post-trascrizionale controllando lo splicing alternativo, la stabilità dell’mRNA e la traduzione su un’ampia varietà di trascritti. Partecipa all’integrazione tra processamento dell’RNA e segnali intracellulari durante la differenziazione cellulare e le risposte allo stress, influenzando reti coinvolte nell’organizzazione del citoscheletro, nel controllo del ciclo cellulare e nell’apoptosi. I programmi di RNA dipendenti da CELF2 contribuiscono alla selezione di isoforme trascrittomiche specifiche di tessuto e sono spesso studiati nel contesto dell’attivazione delle cellule immunitarie e della regolazione genica nello sviluppo. Un’attività di CELF2 deregolata è stata associata a paesaggi di splicing alterati osservati in modelli neuromuscolari e correlati al cancro, motivando studi meccanicistici sui suoi bersagli di RNA e sui partner regolatori.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CUG-BP2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CELF2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CELF2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CELF2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CUG-BP2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CELF2 per lo studio della segnalazione di CUG-BP2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CELF2 critici per la funzione di CUG-BP2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CELF2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CUG-BP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CUG-BP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CELF2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CUG-BP2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CUG-BP2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CELF2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CELF2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.