Partículas Lentivirales de Activación (m) CTH: sc-430767-LAC

El gen Cth de ratón codifica la cistationina gamma-liasa (CTH), una enzima clave de la vía de transulfuración que convierte la cistationina en cisteína, amoníaco y α-cetobutirato, vinculando el metabolismo de la metionina con la homeostasis de los tioles celulares. Al controlar la disponibilidad de cisteína y contribuir a la producción endógena de sulfuro de hidrógeno (H2S), la CTH influye en el amortiguamiento redox, la síntesis de glutatión, la función mitocondrial y la señalización de respuesta al estrés. La actividad de CTH se entrecruza con vías de estrés oxidativo y con la regulación de la inflamación, con relevancia descrita para la desregulación metabólica, la biología vascular y la neurobiología en modelos de enfermedad. Por lo tanto, modular la expresión de Cth es útil para analizar el flujo de aminoácidos azufrados, la sensibilidad a las ROS y los mecanismos de señalización dependientes de H2S en células de mamífero.

Las partículas de activación lentiviral CTH (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Cth en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral CTH (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Cth, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de CTH. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Cth y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.